灵芝三萜类化合物的研究进展(一)

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灵芝是一种大型药用真菌,属于担子 菌岗多孔菌科灵芝属真菌,包括赤芝 G. lucidum( Levss. ex Fr. ) . 和紫芝 G. sinense. 的干燥子实体。始载于《神农本 草经》,历代医书将其列为上品,具有补中益气、滋阴强壮、扶 正固本、延年益寿等功效。灵芝是《中国药典》收录的一种中 药材,是食药兼用的一种真菌,灵芝中的多糖、三萜、核苷、生 物碱、氨基酸多肽、微量元素等成分是其药效物质基础,其中 三萜和多糖是灵芝最主要的两大活性成分。现代药理研究 表明,灵芝三萜类化合物具有保肝、抗肿瘤、抗 HIV1 及 HIV1蛋白酶活性、抗组织胺释放、抑制血管紧张素、抗氧化 等作用。


20 世纪 80 年代,国内外研究者开始深入研究灵芝化学 成分,并取得一定的成效,迄今为止,已成功分离出 200 多种 化合物[1314],并进行了分子结构鉴定。但是,这些工作都 是在实验室进行的,得到的化合物量非常少,只能开展色 谱分析、分子结构鉴定和体外细胞水平的药理活性筛选 等研究工作,而难以开展药理学、药效学和毒理学的深入 研究,极大影响灵芝三萜的继续开发和利用。因此,研究三萜化合物的提取纯化的产业化工艺技 术具有重要的理 论意义和实践意义。本文重点介绍了灵芝三萜类化合物 提取纯化工艺、化 学成分及含量分析的国内外研究现状 及其进展,探讨了产业化制备灵芝三萜类成分的工艺技 术,旨在进一步推动灵芝产业的快速发展,并为保健食 品、药品的研究和生产提供科 学依据。


1 灵芝三萜类化合物的提取 


1. 1 溶剂提取法 灵芝三萜化合物结构相似,难溶于水、易 溶于有机溶剂、性质不稳定,因此分离和纯化的难度比较大。 一般常用甲醇、乙醇、氯仿或乙酸乙酯等有机溶剂在常温或 高温下回流提取。溶剂不同提取效果差异明显。侯敏娜 等采用正交试验方法研究了灵芝三萜的最佳提取方法,得 出最佳的提取工艺为 5 倍量 95%乙醇回流提取 3 次, 每次 1. 5 h, 再用硅胶色谱柱分离,紫外分光光度法测定了灵芝中总三 萜化合物的含量为 9. 07%。Iksoo Lee 等[16]用甲醇回流提取 灵芝三萜类, 甲醇浸膏用水溶解,经正己烷和氯仿反复萃取得 到三萜类粗提物, 提取率 2%。Wang X M 等[17]将灵芝子实体 经 95%乙醇回流提取, 所得浸膏经碱提酸化后用二氯甲烷萃 取出来,浓缩得三萜酸浸膏,提取率 1. 13%。Sri Fatmawati 等[18]将灵芝子实体在室温下用氯仿提取 3 次, 24 h,所得浸膏 经碱提酸化后再由氯仿萃取得到三萜酸浸膏, 提取率 1. 99%。


 1. 2 超声提取法 从灵芝子实体或孢子粉中提取三萜类物 质时,溶剂回流提取法因受其结构影响,花费时间较长。而 采用超声波处理能破坏灵芝的致密结构,使提取时间相比溶 剂提取缩短一半以上,目前已得到广泛应用。张亮 等用超声波辅助法,通过正交试验研究了灵芝三萜的提 取,得到最优的灵芝三萜提取工艺为乙醇用量30 倍,提取温 度 60 ℃,提取时间 60 min,用碱醇( 无水乙醇加碱) 调 pH 8. 5, 可以明显提高乙醇提取灵芝三萜的能力。弓晓峰等通过对黑灵芝的溶剂提取法和超声提取法对比研究,得出在 相同的提取时间内,溶剂回流的提取率( 0. 929 4%) 低于超 声的提取率( 1. 43%) 。Somayeh Keypour 等和 Liu Y L 等采用超声波辅助提取,以氯仿为提取溶剂,提取液过滤 后浓缩得三萜类浸膏,其提取率在 1% ~1. 5%。 


1. 3 微波辅助提取法 微波提取技术是近年来发展起来的 新型提取技术,具有选择性高、耗时少、能耗低、排污量少等优点,是目前天然产物提取的创新技术。该技术是利用产生 的高频电磁波,穿透组织外层结构而迅速到达组织内部,使 组织内部温度和压力迅速上升,导致细胞破裂,有效成分自 由流出的技术。蒉霄云等利用微波技术研究灵芝三萜类 的提取工艺,得到最佳的工艺条件为: 乙醇体积分数 75%、提 取温度 75 ℃、功率 870 W、液料比 33 mL·g -1、时间 17 min, 在此条件下灵芝三萜的平均提取率为 1. 043%,而其他未经 微波 处 理 的 超 声 法、回 流 法、浸 提 法 的 提 取 率 分 别 为 0. 617%, 0. 899%, 0. 658%。Chen Y 等通过对黑灵芝中 三萜类成分提取工艺的研究,分别比较了微波提取法和浸提 法、回流提取法、超临界 CO2流体萃取法和超声提取法,得出 微波提取为最优的提取方案,其最佳提取工艺为 25 倍量的 95% 乙醇作溶剂、提取温度90 ℃、微波功率800 W、提取时间 5 min,总 三萜提取率为 5. 11%,其中三萜皂苷提取率为 0. 968%。其他几种提取法的提取效果。