灵芝多糖抗氧化活性研究

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灵芝[Ganoderma Lucidum(Leyss ExFr)Karst]是一种药用真菌。并且是一种营养和保健价值极高的大型担子菌,灵芝生物活性有效组分多糖的含量很高且种类繁多、其子实体多糖、孢子粉多糖和液态深层发酵培养过程中产生的真菌多糖具有免疫调节,抗肿瘤,抗衰老,清除氧自由基,活血化瘀,抗凝血,降血糖及护肝的功效。灵芝多糖肽、灵芝多糖锗等的药理作用也有大量的实验验证。因而受到国内外学者的诸多关注。目前对灵芝多糖的研究主要集中在子实体和孢子粉上,对灵芝液体深层发酵菌丝体及发酵液的研究还不是很多,因而对液体深层发酵的菌丝体及发酵液多糖的提取、纯化方法及多糖药理功能实验研究,对药物开发具有重要意义。 本文对液体深层发酵菌丝体及发酵液多糖的提取、纯化以及不同提取方法获得的组分的抗氧化活性进行了比较研究。采用分光光度法,分别经苯酚-硫酸和蒽酮-硫酸显色,测定灵芝多糖中的总糖含量,并通过线性范围、精密度、稳定性和准确度的分析对这两种方法进行评价,为灵芝多糖总糖含量准确测定提供科学依据。结果表明,苯酚-硫酸法和蒽酮-硫酸法都具有简单快速,精密度高,准确性好的特点,比较两种方法,测定结果差异不显著。综合文献报道及各种因素,最终选择苯酚-硫酸法作为灵芝多糖测定方法。 本文从灵芝菌丝体及发酵液中,采用热水提取法获得水溶性粗多糖,sevag法除蛋白,得到菌丝体多糖GLPa,再经乙醇分级沉淀,又得到不同级分菌丝体多糖GLP19、GLP31.7、GLP47.5、GLP63和GLP71;采用同样方法获得发酵液多糖GLPfa,经乙醇分级沉淀,得到不同级分发酵液多糖GLPf19、GLPf31.7、GLPf47.5、GLPf63和GLPf71。将菌丝体水提后残渣用0.5mol/LNaOH煮提2次,离心,合并滤液,三倍95%乙醇沉淀,得菌丝体碱提水溶性粗多糖,除蛋白,得菌丝体碱提多糖GLPb。 对以上所得组分进行抗氧化活性的测定。测定结果如下:灵芝菌丝体水溶性多糖和发酵液水溶性多糖、碱提水溶性多糖对H_2O_2/Fe~(2+)通过Fenton反应产生的OH·均具有清除作用,在浓度为200mg/ml时,清除率范围为51.7%~87.6%,且随加入量的增加,清除率上升,即清除率与多糖的用量存在一定的量效关系。三类多糖比较结果显示,灵芝菌丝体水溶性多糖清除OH·能力最强,其中菌丝体水溶性多糖GLP31.7组分清除能力最高,在200mg/ml时可达到87.6%。除蛋白水提多糖清除OH·效果好于粗多糖,而碱提多糖正好与之相反。分析原因,可能是在水提多糖中起清除OH·作用的是多糖,而碱提多糖中是糖蛋白在起作用。上述研究的不同组分灵芝多糖对邻苯三酚自氧化法反应产生的O~(2-)·均具有清除作用,其中多糖组分GLP31.7对O~(2-)·的生成具有最大的抑制率,达到了24.3%。从灵芝菌丝体水溶性多糖、发酵液水溶性多糖和菌丝体碱提多糖清除羟基自由基和清除超氧阴离子自由基的实验结果可以看出,灵芝多糖清除两种自由基的结果基本一致,说明灵芝多糖能同时清除两种自出基,表现出一定的抗氧化能力。不同提取方法获得的多糖组分均有一定的还原能力,在1mg/ml~10mg/ml的浓度范围内还原力随着多糖浓度的增加而增强,多糖各组分的还原力与清除自由基的能力基本一致,清除自由基最强的组分同时也是还原力最强的组分。